Bst 4.0 Basic Mix(with UDG)

商品屬性：

產品介紹：

該制品為雙組分的試劑，Basic Buffer Mix 包含了反應緩沖液、Mg2+、dU/A/C/GTP(不含 dTTP)、凍干賦形劑，酶 Mix 包含 Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶、熱敏 UDG。得益于 Bst 4.0 識別 dUTP 底物，反應底物中不包含dTTP，因此擴增產物均為 dUTP 產物，在配合熱敏 UDG的情況下，實現防污染性能。在實際測試中，含有 10e5Copies 的污染物的條件下，抑制污染擴增。本制品尤其適用于開蓋的 LAMP 反應（如試紙條檢測）、密封腔體（污染風險較高）的檢測試驗（如定量 PCR腔體）。
試劑使用特點：
（1）Basic Buffer Mix 中不含染料，可自行添加 SYBR Green、Eva Green 等染料進行熒光檢測。
（2）本試劑適用于開蓋檢測如核酸試紙條檢測。
（3）試劑中含有凍干賦形劑，試劑可直接凍干，無需再優化凍干配方。

儲存：-20℃保存 1 年；-80℃保存 2 年；短期使用放置于2-8℃，保存 1 個月。反復凍融 10 次，不影響使用。如有白色沉淀，于 37℃水浴放置 10min 后溶解沉淀，不影響使用。
使用方法：
1. 配制 LAMP 反應體系
2.5xBst4.0 Basic BufferMix 10 μl
25xBst4.0/UDG Enzyme 1 μl
10xLAMP Primer Mix 2.5 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到總體積 25 μl
10xLAMP Primer Mix 濃度：FIP/BIP 分別為 16 μM、LoopF/B 分別為 4~8 μM、F3/B3 分別為 2 μM。
注意：如何應用核酸試紙條進行特異性檢測，可來信咨詢。
2. 反應體系配好后，室溫（25-37°C）放置 2min，以消化去除潛在的核酸污染，隨后置于 65°C 進行反應15~30min。
試劑凍干策略（有凍干經驗人員操作）：
1. 配制 LAMP 凍干體系
2.5xBst4.0 Basic BufferMix 10 μl
25xBst4.0/UDG Enzyme 1 μl
10xLAMP Primer Mix 2.5 μl
ddH2O 到體積 1.5 μl
凍干總體積 15 μl
2. 體系配制完畢后，加入 0.2 ml EP 管進行上機凍干。該試劑的凍干體積為 15 μl， 檢測反應體積為 25 μl。

特別說明：
（1）本試劑防污染原理為：熱敏 UDG 消化去除含有 dUTP的擴增產物，熱敏 UDG 在隨后 50℃以上迅速失活，并不影響后續 LAMP 擴增。因此，本試劑無法去除采用 dTTP擴增的污染物，也不能消化天然的核酸底物（DNA/RNA）。為避免擴增氣溶膠污染，實驗室應長期使用本試劑進行實驗，一旦使用 dTTP 試劑擴增后，造成實驗室污染，采用本試劑不會消除假陽性擴增。
（2）本試劑適用基于 OG 染料變色法、SYBR Green 法、基于 Biotin/FAM 探針的核酸膠體金法（ 具有膠體金法特異性使用策略，如需技術支持，請來信咨詢）。本試劑不支持 HNB、pH 顯色法。其它使用策略自行優化調整。
（3）基于本試劑， 提供凍干制備服務。八聯管起訂量 480T，凍干球起訂量 2000T。

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