Ethidium Iodide碘化乙啶(HI)

&使用方法

溶液配制

母液制備：

用DMSO溶解粉末，配成5 mg/ml儲存液（如5 mg粉末+1 ml DMSO），分裝避光保存于-20°C。

工作濃度：

根據實驗調整，常用終濃度為5–20 μg/ml 。

2. 染色步驟（以細菌染色為例）

樣品處理：

取1 ml細菌懸液（密度5×10? cells/ml）置于離心管。

加入20 μl儲存液（終濃度≈100 μg/ml），混勻。

孵育條件：

室溫避光孵育15分鐘。

清洗：

冰DPBS清洗2次（4°C, 3,000 rpm, 10 min）。

檢測：

流式細胞儀：FL2通道（Ex/Em=488/575 nm）。

熒光顯微鏡：使用518 nm激發光，收集600 nm發射信號。

3. 注意事項

避光操作：全程避光防止熒光淬滅。

防護措施：穿戴實驗服及手套，避免直接接觸（潛在遺傳毒性類比溴化乙錠）。

對照設置：需設空白對照（未染色樣品）及單染對照。

試劑信息

英文名稱：Ethidium Iodide碘化乙啶(HI)

CAS NO：211566-66-4

分子式：C25H28IN3

分子量：497.41

狀態：固體

Ex/Em：~518/600nm（與DNA結合）

溶解性：溶于DMSO

純度：≥95%

儲存條件：-20℃避光干燥

&Ethidium Iodide碘化乙啶(HI)作用機制

1.核酸結合機制

碘化乙啶通過嵌入DNA雙螺旋堿基對發揮作用：

其平面菲啶鎓環插入DNA堿基對之間，與核酸形成非共價結合。

結合后染料構象固定，熒光強度增強（游離狀態熒光極弱）。

2. 細胞通透性與選擇性染色

細胞膜通透性：

具中等親脂性，可自由穿透哺乳動物細胞膜及革蘭氏陽性菌細胞壁。

選擇性染色機制：

在含革蘭氏陰性菌（如大腸桿菌）的環境中，優先染色革蘭氏陽性菌。

可能機制：革蘭氏陰性菌外膜脂多糖（LPS）阻礙染料進入，而革蘭氏陽性菌肽聚糖層允許通透。

3. 亞細胞定位

染色真核細胞的細胞質、細胞核，可能涉及線粒體及核仁。

局限性：因可能污染其他亞細胞結構（如內質網），不建議作為特異性核染色劑。

&相關試劑

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本試劑用于科研領域，其他用途概不適用！