| 一、細(xì)胞基本屬性 | |
| 細(xì)胞名稱 | 人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞 |
| 細(xì)胞別稱 | Hacat |
| 細(xì)胞貨號 | SNL-163 |
| 細(xì)胞種屬 | 人 |
| 生長情況 | 貼壁 |
| 培養(yǎng)條件 | H-DMEM+10%FBS+1%雙抗 |
| 培養(yǎng)環(huán)境 | air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% |
| 二、細(xì)胞培養(yǎng)操作 | |
| 換液周期 | 2-3天 |
| 培養(yǎng)基體積 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 傳代比例 | 1:2-1:4（具體情況視細(xì)胞生長速度及密度決定） |
| 傳代方法 | 1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基； 2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細(xì)胞10-20s，吸走潤洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細(xì)胞層； 4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化； 5.消化到細(xì)胞間隙變大，但未*脫落時(shí)加2-3ml*培養(yǎng)基終止胰酶消化； 6.混勻細(xì)胞，900rpm離心3-5min，棄上清； 7.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里； 8.補(bǔ)足*培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)； |
| 注意事項(xiàng) | 不同品牌胰酶消化時(shí)間差別較大，注意嚴(yán)格控制消化時(shí)間 消化傳代細(xì)胞時(shí)吹打細(xì)胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài)。 |
| 三、細(xì)胞凍存操作 | |
| 凍存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手tui薦)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手tui薦); |
| 凍存規(guī)格 | 200-300萬/ml，1ml每管 |
| 凍存方法 | 1.消化并離心獲得細(xì)胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞； 2.將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管； 3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存 |
| 注意事項(xiàng) | 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案 |
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