氨基酸手性檢測(cè)試劑盒

全新專-利產(chǎn)品氨基酸手性檢測(cè)試劑盒

DL-Amino Acid Labeling Kit

該產(chǎn)品是用于 HPLC 分析的氨基酸手性檢測(cè)試劑盒。由于氨基酸具有高親水性且紫外線吸收不足，因此需要在 HPLC 之前標(biāo)記氨基酸。近年來(lái)，D- 氨基酸受到關(guān)注，但對(duì)于常規(guī)的標(biāo)記試劑，例如異硫氰酸苯酯和丹酰氯，需要昂貴的手性柱來(lái)分離 D- 型和 L- 型。

全新專-利產(chǎn)品氨基酸手性檢測(cè)試劑盒，由于使用了D-FDLDA，不需要使用手性柱，用 C18 柱也可實(shí)現(xiàn)手性分離。分離 19 種 DL- 氨基酸以及含有 Gly 的氨基酸時(shí)，可以分離所有的 D- 氨基酸和 L- 氨基酸。

關(guān)鍵詞 ：食品，代謝組學(xué)，氨基酸，多肽，蛋白質(zhì)，HPLC，LC-MS，LC-MS / MS

特長(zhǎng)

l                      操作簡(jiǎn)單

l                      不需要使用手性柱，用 C18 柱也可實(shí)現(xiàn)手性分離

l                      與高靈敏度 MS 分析兼容

l                       標(biāo)記氨基酸穩(wěn)定性高

LC-MS 分析例

使用 LC-MS 分離各種 DL- 氨基酸（方法 1）

分離 19 種 DL- 氨基酸以及含有 Gly 的氨基酸時(shí)，可以分離所有的 D- 氨基酸和 L- 氨基酸。

分析條件：

套裝組成

套裝組成（100 次測(cè)定用）（包括用戶自己需要準(zhǔn)備的物料）

*1 要反應(yīng)的官能團(tuán)總量應(yīng)小于 1.0 μmol。如果更高，則稀釋或減少樣品量。此外，在標(biāo)記（衍生化）時(shí)，請(qǐng)把樣品溶液調(diào)成中性。

*2  使用 (D)FDLDA 作為標(biāo)記試劑。

*3 包含 6-mercapto-1-hexanol [M.W.: 134.24(C6H14OS)]。

*4  反應(yīng)停止液 ：鹽酸

2種方法

本產(chǎn)品中使用的標(biāo)記劑 D-FDLDA 與氨基反應(yīng)。 此外，酪-氨酸的酚羥基、半胱-氨酸的硫醇基等一部分側(cè)鏈也被標(biāo)記。 去除氨基酸側(cè)鏈的標(biāo)記劑（Lys 除外）見(jiàn)下圖藍(lán)框部分。

*1 提前中和樣品

* 標(biāo)記反應(yīng)只需將試劑盒溶液加入樣品溶液并加熱即可。

* 如果加入去標(biāo)簽試劑后沒(méi)有顏色變化（黃色→深橙色），說(shuō)明樣品濃度高，可能有未被標(biāo)記的氨基酸，這時(shí)請(qǐng)稀釋樣品，建進(jìn)行標(biāo)記反應(yīng)。

DL-Tyr 中的標(biāo)記機(jī)制

如果樣品中所含的氨基酸未知，請(qǐng)嘗試方法 1。

來(lái)自標(biāo)記試劑的 HPLC 峰

強(qiáng)烈建議在分析樣品之前先進(jìn)行空白分析。

分析肽成分

分析氨基酸混合物

用氨基酸手性檢測(cè)試劑盒標(biāo)記肽水解后檢測(cè)到的氨基酸，然后使用 LC-MS 分析。

※ L-(Cys)2 檢測(cè)為 L-Cys

< 分析條件 >

Column: COSMOCORE 2.6C18　2.1 mm I.D. × 100 mm

Mobile phase: A: 0.1% Formic Acid - Acetonitrile / H2O = 10 / 90

B: 0.1% Formic Acid - Acetonitrile / H2O = 50 / 50

B conc. 0 → 25 → 45 → 67%（0 → 3 → 15 → 30 min）

Flow rate: 0.4 mL/min

Temperature: 40℃

Detection: ESI(+)-MS

Inj. vol.: 1.0 µL

水解肽的氨基酸分析

N 末端的 Val 為 L 型、中心的 Val 為 D 型的肽（H-VRVAA-NH2: LLDLL-form）在水解后，用 氨基酸手性檢測(cè)試劑盒和異硫氰酸苯酯 (PITC) 對(duì)其進(jìn)行標(biāo)記。

用 PITC 標(biāo)記時(shí)，D-Val 和 L-Val 的峰完-全重疊，無(wú)法識(shí)別外消旋化。 而使用氨基酸手性檢測(cè)試劑盒進(jìn)行標(biāo)記后，因?yàn)榭梢怨鈱W(xué)分離氨基酸，因此也可以用于確認(rèn)合成肽有無(wú)外消旋化。

標(biāo)記試劑的比較

與傳統(tǒng)手性標(biāo)記劑的比較

在通過(guò)非手性柱光學(xué)分離氨基酸中，基于 Marfey 方法，(L)FDAA 或 (L)FDLA 的標(biāo)記劑是已知的，但是該產(chǎn)品的標(biāo)記劑 (D)FDLDA易于電離，因此與傳統(tǒng)方法相比，MS 靈敏度更高，而 UV 靈敏度大致相同。由于使用了 D 型標(biāo)記試劑，因此洗脫順序與常規(guī)方法相反。

與非手性標(biāo)記劑的比較

使用以下四種標(biāo)記試劑進(jìn)行柱前標(biāo)記法比較。

1、DL-Amino Acid Labeling Kit (#19942-74）

2、 Dabsyl Chloride (#10427-91)

3、o-Phthalaldehyde(#27810-44)

4、異硫氰酸苯酯 (PITC) * 僅標(biāo)記樣品的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)

● 分離氨基酸 D 型和 L 型

在 C18 柱上分析被標(biāo)記的 DL- 苯丙-氨酸，氨基酸的 DL 形式不能被非手性標(biāo)記劑的 (2) 和 (3) 非手性標(biāo)記劑分開，但 (1) DL- 氨基酸標(biāo)

記試劑盒因其標(biāo)記試劑結(jié)構(gòu)中有不對(duì)稱碳原子，且氨基酸的 D 和 L 形是非對(duì)映異構(gòu)體，因此能夠分離。

● 質(zhì)譜儀（MS）檢測(cè)靈敏度

我們比較了標(biāo)記的 L- 苯丙-氨酸在質(zhì)譜儀（MS）檢測(cè)時(shí)的靈敏度。 DL- 氨基酸手性檢測(cè)試劑盒中的標(biāo)記試劑和丹磺酰氯都是易于電離的結(jié)構(gòu)，因此在 MS 中的檢測(cè)靈敏度很高。 (4) 由 PITC 生產(chǎn)的 PTC 氨基酸的推薦流動(dòng)相不能用于 MS。

● 標(biāo)記樣品穩(wěn)定性

在反應(yīng)日后第 1 天、3 天和 7 天通過(guò) HPLC 分析標(biāo)記的 L- 苯丙-氨酸。 用鄰苯二甲醛標(biāo)記的樣品穩(wěn)定性較差，不適合手動(dòng)標(biāo)記，應(yīng)僅限用于分析儀的在線分析。 PITC 標(biāo)記的樣品也不太穩(wěn)定。

※ 將反應(yīng)后第一天的峰面積設(shè)為 100%。 PITC 標(biāo)記的樣品冷凍保存，其他樣品冷藏保存

定量表現(xiàn)

氨基酸標(biāo)記反映

DL-Tyr 根據(jù)標(biāo)記方法不同，標(biāo)記試劑結(jié)合數(shù)量不同。使用 DL-Tyr 測(cè)量標(biāo)記反應(yīng)隨時(shí)間的變化，結(jié)果表明，氨基酸在開始 2 小時(shí)內(nèi)被完-全標(biāo)記。

標(biāo)記的后 DL- 氨基酸的 DL 體比率

標(biāo)記 2 小時(shí)后，根據(jù)每個(gè) DL- 氨基酸的峰面積值計(jì)算 DL 體的比例，發(fā)現(xiàn)標(biāo)記精確到 1:1。 另外，確認(rèn)單獨(dú)反應(yīng)的 D 型和 L 型氨基酸的光學(xué)純度 (e.e) 時(shí)，所有氨基酸的光學(xué)純度均為 100％。

多肽標(biāo)記反應(yīng)

不僅氨基酸，短鏈肽也可以與氨基酸用相同的方式進(jìn)行標(biāo)記，而不用管序列的長(zhǎng)度或標(biāo)記試劑的結(jié)合位點(diǎn)的數(shù)量。

*1 βAla: β-丙-氨酸*2兩種標(biāo)記劑與Lys賴氨酸側(cè)鏈的氨基結(jié)合

●定量表現(xiàn)

用該試劑盒標(biāo)記的不同濃度的氨基酸通過(guò) HPLC 分析。校準(zhǔn)曲線在測(cè)試濃度范圍內(nèi)顯示出高度線性。

其他應(yīng)用數(shù)據(jù)

l                      4種Thr異構(gòu)體的分離（HPLC/方法1）

l                      同時(shí)分離 C18 色譜柱難以分離的堿性化合物（LC-MS / 方法 1）

咪唑二肽的分離（HPLC/ 方法 1）

其他應(yīng)用數(shù)據(jù)

● 運(yùn)動(dòng)飲料（方法 2 HPLC）

● MEM non-essential 氨基酸溶液（方法 1 LC/MS）

● 市售氨基酸飲料（方法 2 HPLC）

● 組胺（方法 1 HPLC）

除氨基酸外，該產(chǎn)品還可用于其他胺和硫醇化合物。

訂購(gòu)信息

專-利產(chǎn)品

COSMOSIL / COSMOCORE 是 Nacalai Tesque, Inc. 的注冊(cè)商標(biāo)

For research use only, not intended for diagnostic or drug use.