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2012-11-8
免疫測定的實驗設計主要涉及到抗體或抗原的使用濃度、溫育溫度、溫育時間、測定模式是采用競爭抑制或雙夾心直接測定，以及雙夾心測定是采用一步還是兩步法等，其對測定的影響主要是試驗的測定下限、特異性和簡便性等。一般來說，較高的抗體或抗原反應濃度、較高的溫育溫度（如37度而非室溫下）、較長的溫育時間可以改善免疫試驗的測定下限，但這一切又只是相對的，還要從試驗的實際應用著想，進行合理的優化。雙抗夾心酶免疫試驗由于其簡單方便，又具有較好的測定下限和特異性，在大多數蛋白激素和腫瘤標志物的測定上，現已基本上取代了放免競爭抑制試驗。雙抗夾心測定模式以兩步法進行（即臨床樣本與酶標抗體分兩步加入），可避免許多用一步法時可能會出現的問，題，如與標記抗體可能發生交叉反應但與固相捕獲抗體無交叉反應的物質可在*步溫育后的洗滌步驟中去除；又如一步法常出現的“鉤狀”效應（即抗原濃度很高時反應顯色反而很淺，表現為測定假陰性）使用兩步法就可以避免。但由于兩步法所需測定時間相對要長一些，因此目前在臨床實驗室中使用較多的是一步法。此外，當所測物質分子大小不一致時，大分子的反應通常較小分子要慢，如溫育時間短，也會造成測定偏差。例如，在測定復合的前列腺特異抗原（PSA）（Mr90kD）時，如使用較短的溫育時間，與游離PSA相比，其結果將偏低。
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