Fluo-5N AM,Cell Permeant，鈣離子熒光探針

技術參數

其他名稱：Fluo-5N, Acetoxymethyl Ester

分子式：C50H47F2N3O25

分子量：1127.92

解離常數：~90µM

純度：≥95%

儲存條件：-20℃避光干燥

化學結構式：

相關描述

Fluo-5N AM,Cell Permeant，鈣離子熒光探針是Fluo-4的結構類似物，具有較低的鈣結合親和力，可用于鈣水平在1µM~1mM區間內的胞內鈣離子檢測，而Fluo-3和Fluo-4在這個區間內的鈣離子反應達到飽和。

Fluo-5N AM,Cell Permeant，鈣離子熒光探針，激發和發射波長分別是494和516nm。

使用方法

A， 試劑準備

1） 配制Pluronic F-127母液：稱取100mgPluronic F-127粉末中加入500μl DMSO，配制成20% DMSO母液。溶解過程需要在40-50℃加熱20-30min。

溶液室溫保存，不用冷藏。如有結晶析出，可以重新加熱后溶解，不影響使用。

2）HHBS Buffer(1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.2)或者其他生理緩沖液 。

B， 操作步驟

1） 用無水DMSO溶解Fluo-5NAM配制成2-5mM的儲存液，或將已配好的Fluo-5NAM儲存液取出于室溫回溫。

（如：若配制成4mM的母液，需向50µg Fluo-5NA M中加入11µl無水DMSO）。

準備Fluo-5NAM工作液之前，有時需要往Fluo-5NAM儲存液中加入20% Pluronic F-127溶液，增強AM探針的水溶性。

2） 用HHBS或其他生理緩沖液（含鈣鎂）將Fluo-5NAM+DMSO儲存液稀釋到1-20µM的工作液。

3） 如果細胞內含有機陰離子轉運體，磺吡酮（Sulfinpyrazone）可能需要加入細胞培養基內，以降低去酯化探針的泄露水平。

4） 將準備好的Fluo-5NAM染色工作液加入細胞，加入量以覆蓋細胞為準。室溫或37℃孵育20-120min。

5） 吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理緩沖液清洗細胞1~2次，以去除殘留探針。

6） 室溫再孵育30min以保證細胞內AM的去酯化。

7） 可用激發/發射波長來檢測熒光。

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