犬基質金屬蛋白酶9(MMP-9)elisa試劑盒

本試劑盒只能用于科學研究，不得用于醫學診斷。
犬基質金屬蛋白酶9(MMP-9)定量檢測試劑盒(ELISA)
使用說明書
【試劑盒名稱】
犬基質金屬蛋白酶9(MMP-9)定量檢測試劑盒(ELISA)
【試劑盒用途】
定量檢測犬血清、血漿及相關液體樣本中基質金屬蛋白酶9(MMP-9)的含量。
【檢測原理】
本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)。將標準品、待測樣本加入到預
先包被犬基質金屬蛋白酶9(MMP-9)單克隆抗體透明酶標包被板中，溫育足夠時間后，洗
滌除去未結合的成分，再加入酶標工作液，溫育足夠時間后，洗滌除去未結合的成分。依次
加入底物A、B，底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉化為藍色產物，在酸的
作用下變成黃色，顏色的深淺與樣品中犬基質金屬蛋白酶9(MMP-9)濃度呈正相關，450nm
波長下測定OD 值，根據標準品和樣品的OD 值，計算樣本中犬基質金屬蛋白酶9(MMP-9)
含量。
【試劑盒組成】
1 酶標包被板12 孔×8 條7 顯色劑A 液6mL
2 標準品0.3mL×6 管8 顯色劑B 液6mL
3 20 倍濃縮洗滌液25mL 9 終止液6mL
4 樣本稀釋液6mL 10 說明書1 份
5 特殊稀釋液6mL 11 封板膜2 張
6 酶標試劑6mL 12 密封袋1 個
備注：標準品(1 號→6 號)濃度依次為：120、60、30、15、7.5、3.75μg/L.
【需要而未提供的試劑和器材】
1、37℃恒溫箱
2、標準規格酶標儀
3、精密移液器及一次性吸頭
4、蒸餾水
5、一次性試管
6、吸水紙
【操作步驟】
1、準備：從冰箱取出試劑盒，室溫復溫平衡30 分鐘。
2、配液：用蒸餾水將20 倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標準品和待測樣本：取足夠數量的酶標包被板，固定于框架上，分別設置標準品孔、
2
待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標準品孔中加入標準品50μL；待測樣本孔中先
加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5 倍)；空白對照孔不加。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙
上拍干，如此重復洗板4 次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。
6、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL，空白對照孔不加。
7、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
8、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙
上拍干，如此重復洗板4 次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B 液50μL，平板混勻器混勻30s
(或用手輕輕震蕩混勻30s)，37℃避光顯色15min。
10、終止：取出酶標板，每孔加終止液50μL，終止反應(顏色由藍色立轉黃色)。
11、測定：以空白孔調零，在終止后15 分鐘內，用450nm 波長測量各孔的吸光值(OD 值)。
12、計算：根據標準品的濃度及對應的OD 值，計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣
本的OD 值，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度，也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃
度為實際測定濃度乘以稀釋倍數。
【樣本要求】
1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3)，因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。
2、標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能立即
試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。
3、樣本應充分離心，不得有溶血及顆粒。
【注意事項】
1、實驗嚴格按照說明書的操作進行，實驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
2、酶標包被板開封后如未用完，應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實驗誤差。
4、牢記樣本已經稀釋5 倍，計算結果乘以5 才是樣本實際濃度。
5、本試劑盒定量范圍為3.75-120μg/L，超過此范圍，為標準曲線延伸計算所得，不做為準
確定量結果，請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結果(3.75-120μg/L 范圍內)，乘以總稀釋倍數
即為樣本zui終濃度。
6、若顯色過淺，可適當延長底物溫育時間。
7、為避免交叉污染，標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭；酶標工作液、
樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔；不得重復使用封板膜。
8、試劑盒保質期內使用，不同批號的試劑不得混用。
9、底物B 對光敏感，避免長時間暴露于光下。
3
【操作程序總結】
準備試劑，樣品和標準品
加入準備好的樣品和標準品，37℃反應30 分鐘
洗板4 次，加入酶標試劑，37℃反應30 分鐘
洗板4 次，加入顯色液A、B，37℃顯色15 分鐘
加入終止液
15 分鐘之內讀OD 值
計算
【檢測范圍】
3.75μg/L - 120μg/L
【規格】
96 人份/盒
【貯藏】
2-8℃，避光防潮保存。
【有效期】
6 個月