活化 Ras Pull-Down 和檢測(cè)試劑盒

Thermo Scientific 活化 Ras 沉降和檢測(cè)試劑盒能夠通過(guò)與 Raf1 蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域的特異性蛋白相互作用選擇性地富集和檢測(cè) GTP 結(jié)合 Ras GTPase。

活化 Ras 沉降和檢測(cè)試劑盒包含純化的 GST-Raf1 Ras 結(jié)合結(jié)構(gòu)域 (RBD)、瓊脂糖樹脂、陽(yáng)性和陰性對(duì)照品（分別為 GTPγS 和 GDP）、裂解/結(jié)合/洗滌緩沖液、抗 Ras 抗體、SDS 樣品緩沖液、離心柱和收集管。該試劑盒使用 NIH 3T3 細(xì)胞的裂解物進(jìn)行驗(yàn)證，已知該細(xì)胞系具有穩(wěn)健的 Ras 活性。

活化 Ras 沉降和檢測(cè)試劑盒的特點(diǎn)：

?高靈敏度和精確度—優(yōu)化試劑、特異性抗 Ras 抗體和 Western 印跡程序可確保精確控制和半定量結(jié)果
?經(jīng)驗(yàn)證—對(duì) Ras 檢測(cè)進(jìn)行功能檢測(cè)，以確保質(zhì)量和性能
?兼容—可有效兼容小鼠、大鼠和人類來(lái)源的多種細(xì)胞類型

應(yīng)用：
?追蹤細(xì)胞分化、遷移、分裂和細(xì)胞骨架重排期間的 Ras GTPase 活化
? 研究活化 Ras 在癌癥和血管新生中的作用
?監(jiān)測(cè)使用生長(zhǎng)因子刺激后的 Ras 活性
?篩查小分子抑制劑對(duì) Ras 活性的影響

使用經(jīng)用于活化內(nèi)源性 Ras 的 GTPγS 處理的細(xì)胞裂解物相對(duì)于經(jīng)滅活小 GTPase 的 GDP 處理的裂解物，驗(yàn)證了活化 Ras 沉降和檢測(cè)試劑盒的活化 Ras 富集方法的功能和特異性。GTPγS 處理捕獲 GTP 結(jié)合活化形式的 Ras，在存在內(nèi)源性 Ras 時(shí)產(chǎn)生強(qiáng)烈信號(hào)。GDP 處理使 Ras 進(jìn)入 GDP 結(jié)合的非活化狀態(tài)，無(wú)論 Ras 蛋白水平如何均幾乎不產(chǎn)生信號(hào)。對(duì)該試劑盒進(jìn)行了優(yōu)化，用于使用 HRP 偶聯(lián)二抗（山羊抗小鼠 IgG，產(chǎn)品編號(hào) 31430）和 Thermo Scientific SuperSignal West Pico 化學(xué)發(fā)光底物（產(chǎn)品編號(hào) 34080）進(jìn)行 Western 印跡檢測(cè)。每個(gè)試劑盒均包含足夠用于 30 次沉降實(shí)驗(yàn)的組成部分。

試劑盒組成部分也可用于免疫熒光染色。使用 NGF 刺激神經(jīng)元 NS-1 細(xì)胞，以使用試劑盒中提供的 GST-RBD 蛋白和抗 Ras 抗體研究活化 Ras 的空間分布。

Ras 背景：
以大鼠肉瘤病毒致癌基因命名的 GTPase 的 Ras 超家族包含多種 Ras 同源異構(gòu)體，包括 K-Ras、H-Ras 和 N-Ras。雖然三種同源異構(gòu)體在不同細(xì)胞類型中的表達(dá)水平有所不同，但是一般而言，在所有癌癥中 ～15% 存在這些同源異構(gòu)體中至少一種的激活突變。Ras 蛋白作為來(lái)自細(xì)胞外分子的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的啟動(dòng)物，通過(guò)羧基端脂質(zhì)修飾和異戊烯化與質(zhì)膜相連接。這些羧基端的修飾決定了 Ras 在不同膜微結(jié)構(gòu)域的定位，從而決定后續(xù)的下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。Ras 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路影響多種細(xì)胞過(guò)程，包括增殖、存活、囊泡運(yùn)輸和基因表達(dá)。

通過(guò) Ras 進(jìn)行的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)對(duì)多種細(xì)胞反應(yīng)至關(guān)重要，且 Ras 的活化受到 GEF 和 GAP 蛋白的調(diào)控。GEF 蛋白通過(guò)將 GDP 從非活化 Ras 中解離來(lái)介導(dǎo) GTPase 活化，以使 Ras 結(jié)合到 GTP 上。相反，GAP 蛋白通過(guò)將 GTP 水解為 GDP 滅活 GTPase。Ras 通過(guò)與效應(yīng)蛋白（包括 Raf 和 PI3 激酶）相互作用來(lái)介導(dǎo)下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。Raf1 是一種/蛋白激酶，是 MAP 激酶激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的一部分，該通路可活化 ERK 和 p38，從而影響增殖和存活。PI3 激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)可使 AKT 和 mTOR 活化，這對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和存活至關(guān)重要。Ras 也是細(xì)胞分化和發(fā)育（包括免疫細(xì)胞發(fā)育和功能）的組成部分。

更多產(chǎn)品數(shù)據(jù)
?通過(guò)特異性下游效應(yīng)子測(cè)定小 GTPase 的激活
?在神經(jīng)元細(xì)胞分化過(guò)程中檢測(cè)和定位活性 GTPase