活化 Arf1 Pull-Down 和檢測試劑盒

Thermo Scientific Pierce 活化 Arf1 沉降和檢測試劑盒是一種全套試劑盒，能夠通過與 GGA3 蛋白結合結構域的特異性蛋白相互作用選擇性地富集和檢測 GTP 結合 Arf1 GTPase。

活化 Arf1 沉降和檢測試劑盒包含純化的 GST-GGA3 結合結構域 (PBD)、瓊脂糖樹脂、陽性和陰性對照品（分別為 GTPγS 和 GDP）、裂解/結合/洗滌緩沖液、抗 Arf1 一抗、樣品緩沖液、離心柱和收集管。該試劑盒使用 MDCK 細胞的裂解物進行驗證，已知該細胞系具有穩健的 Arf1 活性。

活化 Arf1 沉降和檢測試劑盒的特點：

?高靈敏度和精確度—優化試劑、特異性抗 Arf1 抗體和 Western 印跡程序可確保精確控制和半定量結果
?經驗證—對 Arf1 檢測進行功能檢測，以確保質量和性能
?兼容—對小鼠、大鼠和人來源的多種細胞類型有效

應用：
? 追蹤細胞分化、遷移、分裂和細胞骨架重排期間的 Arf1 GTPase 活化
? 研究外殼蛋白組裝至出芽囊泡或反式高爾基體網絡和內體期間 Arf1 的活化
? 監測使用生長因子刺激后的 Arf1 活性
? 監測小分子抑制劑處理后的 Arf1 活性

使用經用于活化內源性 Arf1 的 GTPγS 處理的細胞裂解物相對于經滅活小 GTPase 的 GDP 處理的裂解物，驗證了活化 Arf1 沉降和檢測試劑盒的活化 Arf1 富集方法的功能和特異性。GTPγS 處理捕獲 GTP 結合活化形式的 Arf1，在存在內源性 Arf1 時產生強烈信號。GDP 處理使 Arf1 進入 GDP 結合狀態（非活化），無論 Arf1 蛋白水平如何均幾乎不產生信號。對試劑盒進行了優化，用于使用 HRP 結合型二抗（山羊抗兔 IgG，產品編號 31460）和 Thermo Scientific SuperSignal West Pico 化學發光底物（產品編號 34080）進行 Western 印跡檢測。試劑盒所含成分均足夠進行 30 次沉降實驗。

Arf1 背景：
ADP 核糖基化因子蛋白 1-6 (Arf) 是 Ras 小 GTPase 家族的成員。雖然在結構上相似，但 Arf1-6 的細胞作用不同于其他 Arf 家族成員；其內源性作用不是 ADP 核糖基化，而是調節異源三聚體 G 蛋白。Arf 蛋白可分為三類：I 類 — Arf 1-3；II 類 — Arf 4,5；III 類 — Arf6。I 類和 II 類 Arf 與反式高爾基體網絡 (TGN) 相關，參與將效應蛋白募集至高爾基體膜并形成囊泡。與其他 GTPase 不同，Arf GTPase 在氨基末端通過豆蔻?；揎椧员悴迦肽ぶ?。III 類蛋白 Arf6 與質膜相關，參與質膜處的囊泡形成、囊泡再循環和肌動蛋白細胞骨架的重構。

盡管 Arf GTPase 在所有細胞中均有表達，但 Arf1 是極豐富、極活躍和進行表征的。Arf1 將其效應子（包括外被體和網格蛋白適配體復合物 (AP)）募集至高爾基體，發生囊泡形成和出芽。募集后，Arf1 維持膜上的外殼蛋白，直至形成囊泡。然后，Arf1 與其效應子相互作用，使得 Arf1 從膜中釋放和囊泡出芽。高爾基體局部含 γ耳 Arf (GGA) 效應子結合蛋白包含氨基端 VHS 結構域、GGA 同源結構域 (GGAH)、富含的連接區和羧基-末端 γ-耳銜接蛋白同源結構域 (AGEH)。VHS 結構域與細胞質結構域相互作用（進行受體分選）、GGAH 與活化 Arf 結合、富含的區域與網格蛋白相互作用以及 AGEH 結構域與細胞溶質蛋白相互作用。通過突變研究，已證明 GGAH 結構域足以結合 GTP 結合型 Arf，并且 Arf1 可結合所有三種 GGA 效應蛋白。GGA 蛋白與 TGN 和質膜的關聯受 Arf 調節。

更多產品數據
?通過特異性下游效應子測定小 GTPase 的激活